普利沃

INT.E.G.RA

采用皮肤发炎®试验法评估普利沃公司所提供的一号样品---敌腐特灵
（ref. Conf. ord 2005-024 普利沃 ord N. LM050330001）

完成日期：2005年4月19日

执行情况总结
试验中采用了皮肤发炎®试验法，预测普利沃公司所提供的样品导致皮肤发炎的可能性。

经试验表明，敌腐特灵D550305A*不引起皮肤发炎

试验结果

表1 人刺激性当量（HIE）分数与皮肤发炎®试验法之刺激性分类之间的关系

试验中采用皮肤发炎®试验法，以便预测普利沃公司所提供样品导致皮肤发炎的可能性。
在皮肤发炎®试验法使用中，还采用了标准“药剂-反应”研究。试验结果显示在下表中。

试验结果：

背景

发炎®试验系统是一种创新的试验，试验中采用特制的基体与必要的设备，通过专门的软件读取并详述试验结果数据。这一软件可以发现并预测所试验产品的不同形式引起皮肤发炎的可能性。
该系统速度快且可靠，因此，可以用于在先前完成的产品试验中增加刺激性因素，或在更大范围的产品上扩展试验。

开发发炎®试验的最初原因在于，体外试验很可靠，能代替斑贴实验。因此，该研究专注于对体内试验中观察到的角质浑浊和皮肤发炎机制的认识，其目的是要发现能代替接触到试验物质后受损皮肤和角质蛋白的基体。该研究引发了EyetexTM 和 SkintexTM试验方案的发展，顺而导致当前的发炎试验的发展。

图1 皮肤发炎基体

众所周知，眼睛和皮肤发炎试验基于著名的生化机制。特别是，经论证，由于蛋白质形成结构和碳水化合物形式的原因，角质在通常情况下是透明的。角质形成碳水化合物的形式，并显示出明显的内部组织状态。当引起发炎的试剂放在眼睛上时，这些试剂则改变了蛋白质的四元形成结构，导致角质浑浊。角质浑浊是德莱赛眼刺激试验的一个观察参数。在发炎®试验发展过程中，经发现，当刺激性试剂应用于蛋白质和糖蛋白的混合物时，这一过程可在体外模拟。
在发炎®试验中采用的试剂基体的主要成分是由12个单位构成的寡聚蛋白质，其明显的分子重量约为320.000 D。寡聚蛋白质容易形成自动结合结构，通过非共价键反应进行结合。这样的基体可包含碳氢化合物、脂类以及低分子重量的成分。这些成分与其他成分在生理溶液中重新产生类似皮肤的结构。
经证实，当刺激性试剂用于发炎®试验基体时，产生的影响类似于体内产生的影响。而且，对干扰体内角质和发炎®试验中人造基体的蛋白结构进行干扰的影响可与刺激性试剂的积极性相关联，因为导致基体浑浊的粒子成核结果与被测试物质的刺激性因子成一定比例。这一现象可用定制的分光测光仪通过光密度测光仪测量进行量化。按照皮肤发炎®试验方案，光密度测量在450纳米（OD400）的范围进行，而按照眼睛发炎®试验方案，光密度测量在400纳米（OD400）的范围进行。
由于试验物质与基体接触的时间长度是一个关键参数，所以试验采用了一张可半渗透的膜，其孔隙度可控制，这一膜使得最大浑浊点更容易发现。然后，最大浑浊点由分光测光仪确定。
基于同时进行的、用以确定校正缺陷的实验，根据下述总结，可以发现斑贴实验与通过发炎®试验方案确定的等级（发炎分数）之间的直接关联：

表1 人刺激性当量分数与皮肤发炎®试验法之刺激性分类之间的关系

试验结果分析

在紫外线分光测光仪界面，通过软件详述的光密度值被分为三组：样品值、校准指和质控值。质控值由包含在每一个发炎®试验盒中的两份样品构成，带有一个误差区域，两份样品在两个主视窗上提供一个发炎分数（引起发炎与不引起发炎）。这些物质从那些给测试造成最大困难的物质中选出，结果形成了自测试。如果任何参数结果不在预测的误差范围内，测试结果则不合格，软件未给出精密的结果。
校准物为每一实验盒中的4份样品。这些样品具有双重功能。一种功能是验证所采用基体/多孔隔膜的批次。另一种功能是提供将每一批所用试验盒的光密度（OD）转换为发炎分数（IDE）的最佳校准线。这4份校准样品自然处于四个视窗。如果其中一个样品不在确定的误差范围内，测试结果则不合格，软件未给出精密的结果。
根据采用校准物而获得的OD，如果质控在误差范围内，软件则将样品的OD与斑贴试验发炎分数当量相关联。基于与斑贴试验平行进行的关联试验，最显著的数值证明是那些评估对象的最大值（最大有效分数）。

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